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载体DNA的保护伞——Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase

作者:admin 信息来源:ob游戏 日期:20190610 打印 字体:  
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是生物体非常重要的一类蛋白质,之前小达君给大家安利了Lucigen的RNase RRNase R——RNase家族的“外貌协会成员")CircLigase™ II ssDNA Ligase“单链DNA环化连接酶——CircLigase™ II ssDNA Ligase”)和Fast-Link™ T4 DNA Ligase (五分钟完成粘末端连接?Fast-Link™ DNA Ligation Kit,您值得拥有!),今天继续给大家介绍一款特色的DNA外切酶,以去除Fosmid等文库纯化过程中细菌基因组DNA的污染,一起来了解下吧~

Plasmid-Safe™ATP-Dependent DNase在弱碱性pH值条件下,能消化线性双链DNA为脱氧核苷酸。它对于环状或线性单链DNA效率较低,并且对于缺口或闭环的双链DNA超螺旋DNA没有活性。

在质粒,粘粒和BAC克隆载体等载体DNA的制备过程中,使用碱裂解法会产生细菌染色体DNA片段的污染。如果使用某些方法没有有效的去除污染DNA,那么污染的DNA会连接入克隆载体导致假阳性,高背景或错误的测序结果。实验室常规方法,如纯化柱或氯化铯离心不能有效的去除这些污染,因此还需要进一步的纯化。而Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase可以选择性的去除质粒,粘粒和BAC克隆载体制备中污染的细菌染色体DNA(图1)。因此,Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase是纯化质粒,粘粒和BAC克隆载体的理想选择。 

应用:

  • 在大规模质粒,粘粒和BAC克隆载体制备中去除污染的细菌染色体DNA

  • 消化线性DNA而不消化带切口或闭环的dsDNA或超螺旋DNA(质粒,fosmid等)

  • 用作质粒,粘粒,fosmid,BAC载体和克隆制备物的最终纯化步骤

  • 保护环状dsDNA

测试结果:

△图1. 从质粒制备物中去除污染的基因组DNA效果图


泳道1:3ug的Sma I消化的细菌染色体DNA;

泳道2500ng的未被切割的质粒DNA;

泳道3:Plasmid-Safe™ DNase处理前,3ug的消化的染色体DNA和500ng未消化的质粒DNA;

泳道4:Plasmid-Safe™ DNase处理后的染色体DNA和质粒DNA混合物;

泳道M:Kilobase ladder;


△图2.消除产生白色菌落的线性DNA


3ug的EcoR I消化的细菌基因组DNA中加入2ug含有lacZ的超螺旋质粒载体。取一半混合物用Plasmid-Safe™ DNase处理;另一半不处理,作为对照。待Plasmid-Safe™ DNase热灭活后,将DNA用EcoR I处理,然后用T4DNA连接酶连接过夜,并转化到感受态细胞中,铺至含有IPTG/X-gal培养基上。用Plasmid-SafeDNase处理的DNA,只有1-3%菌落呈白色,而对照DNA白色菌落数大于50%。利用Plasmid-Safe™ DNase能消除几乎所有的线性DNA。

产品信息:

产品名称

规格

货号

商城报价

Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase

1,000 U @ 10 U/ul

E3101K

¥1,027

Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase

1,0000 U @ 10 U/ul

E3110K

¥5,421


美国Lucigen公司成立于1998年,提供各类用于分子生物学相关产品,可以使研究者成功克隆较难克隆的基因,其在2016年收购了Illumina旗下Epicentre产品线。目前产品类别主要包括:体外转录、基因克隆(BAC克隆试剂盒)、感受态细胞(TG1噬菌体文库构建感受态)、体外扩增、转座子突变、蛋白表达、文库构建等。


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