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Naïve T cell 细胞极化之Th9

作者:admin 信息来源:ob游戏 日期:20140610 打印 字体:  
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Naïve T cell 细胞极化之Th9


Th9细胞:Th9 细胞是一种新型的辅助性T细胞的亚群,它对抗寄生虫感染特别是线虫起着重要作用。IL-4 与 TGF-β同时作用可诱导初始T细胞分化成 Th9 细胞,Th2 细胞在 TGF-β作用下可转化为 Th9 细胞。除了分泌抗炎性细胞因子 IL-10 外,Th9 同时也与炎性疾病相关,比如过敏性炎症。Th9 细胞不表达其它Th细胞已知的特异转录因子,包括 T-bet, GATA-3, Foxp3 还有 ROR γt, 其中 GATA-3 在 Th9 分化初期一度出现。分泌的细胞因子主要为 IL-9 和 IL-10

 Naïve T cell 细胞极化之Th9


小鼠脾脏细胞Th9极化实验


1.根据实验方法从小鼠脾脏中分离出细胞。


2. anti-mouse  CD3ε 包被实验:在细胞培养板上,加入 anti-mouse  CD3ε, clone 145-2C11  (5μg/ml)37℃孵育2小时或者4℃过夜。然后将液体轻轻地倒出,用无菌 PBS 进行清洗3次,弃上清。


3.将分离出的脾脏细胞以1 x 106/ml的浓度种于包被好的培养板中,同时加入 anti-mouse  CD28, clone 37.51 (5μg/mL), TGF-β1 (10 ng/mL), IL-4 (10 ng/mL), IL-2 (20ng/ml), anti-mouse  IFN-β (10μg/mL)进行培养。


4.细胞培养3天后,收集细胞进行清洗。然后用含有500 ng/ml PdBU, 500 ng/mL  ionomycin,  以及 Brefeldin  A  的培养基对细胞进行刺激4-5小时。


5. 细胞结束刺激后,收集细胞,进行染色实验。


相关实验材料


RBC  Lysis  Buffer  ( cat. # 420301 ), Anti-mouse  CD3e,  clone  145-2C11  ( LEAFTM  format,  cat. # 100314), Anti-mouse  CD28,  clone  37.51,  ( LEAFTM  format, cat. # 102112 ), Anti-mouse  IFN-g  ( LEAFTM  format, cat. # 505812 ), Recombinant  mouse  IL-4  ( cat. # 563202 )R ecombinant  human  TGF-b1  ( carrier-free )  ( cat. # 580702 ), Recombinant  mouse  IL-2  ( cat. # 575402 ),  Brefeldin  A  ( cat. # 420601 ), PMA  ( cat. # P8139  from  Sigma ), Ionomycin  ( cat. # I0634  from  Sigma )


参考文献:


1. Soler, D. et al. 2006. J Immunol. 117:6940.           


2. Schmitt, E. et al. 1994. J Immunol. 153:3989.


3. Veldhoen, M. et al. 2008. Nat Immunol. 9:1341.      


4. Darhalhon, V. et al. 2008. Nat. Immunol. 9:1347.

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