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Naïve T cell 细胞极化之Treg

作者:admin 信息来源:ob游戏 日期:20140610 打印 字体:  
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Naïve T cell 细胞极化之Treg


Treg 细胞:Treg 细胞(也称作调节性T细胞或者是T调控细胞)是具有显著免疫抑制性功能的细胞。它能够抑制其他细胞的免疫应答,在维持机体免疫平衡和预防自身免疫疾病、移植排斥方面发挥着重要作用。Treg 细胞特异性地表达 CD4CD25Foxp3+, CD127 不表达或者弱表达。IL-2 和 TGF-β 是诱导 Treg 主要的细胞因子。 

 Naïve T cell 细胞极化之Treg


小鼠脾脏CD4+ T细胞Treg极化实验


1.根据实验方法从小鼠脾脏中分离 naive  CD4 CD25−  T 细胞。


2. anti-mouse  CD3ε 包被实验:在细胞培养板上,加入 anti-mouse  CD3ε,  clone  145-2C11  (10 μg/ml),37℃ 孵育2小时或者4℃过夜。然后将液体轻轻地倒出,用无菌 PBS 进行清洗3次,弃上清。


3.将分离出的 naive  CD4 CD25  T 细胞以 5 x105/ml 的浓度种于包被好的培养板中同时加入 anti-mouse  CD28, clone  37.51  (10 μg/ml), TGF-β1  (5 ng/mL), IL-2 (10 ng/ml)进行培养。


4.细胞培养3天后,收集细胞进行清洗。然后进行细胞染色实验。


实验相关材料


RBC  Lysis  Buffer  (cat.  # 420301); Anti-mouse  CD3(LEAF™  format,  cat. # 100314), Anti-mouse  CD28  (LEAF™  format,  cat. # 102112), Recombinant  Mouse  IL-2  (carrier-free)  (cat #575402), Recombinant  human  TGF-β1  (carrier-free)  (cat.  # 580702),  Brefeldin  A  (cat.  # 420601), PdBu  (Phorbol  12,13-dibutyrate)  (cat.  # P1269  from  Sigma)


参考文献:


1.Rahul Roychoudhuriet al. 2013.Nature 498:506-510.  


2. Nicholas Arpaiaet al. 2013.Nature 504:451-455.


3. Steven Z. Josefowicz,et al.2012.Nature 482:395-399.

  

4.Emily B Heikamp,et al.2014 Nature Immunology 15:457-464.

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